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技術(shù)文章 / article
ATCC細胞冷凍保存方法
原載自：estasasalvo.com[技術(shù)資料頻道] 2018-02-24 瀏覽次數(shù)：3009
ATCC細胞通常保存在凍存管中用干冰運輸，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運輸。但對于中國客戶，由于運輸時間稍長，都是采用干冰運輸?shù)姆绞健?div> 在收到凍存細胞后，很重要的一點是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點，需將細胞存儲在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細胞儲存在高于-130℃的溫度下，這會使細胞存活率迅速下降。
ATCC細胞注意事項：
（1）欲冷凍保存之細胞應(yīng)在生長良好（logphase）且存活率高之狀態(tài)，約為80–90％致密度。
?。?）冷凍前檢測細胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。
?。?）注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色（以0.22micron FGLP flon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650），以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。
ATCC細胞冷凍保存方法：
?。?）傳統(tǒng)方法：冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16～18小時（或隔夜）→液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
（2）程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
